Өнімдер

Протеомдық фосфорлану оқиғаларын талдау белок фосфорлану желілерінің күрделілігіне байланысты әлі де негізгі аналитикалық қиындық болып табылады.Бұл жұмыста біз Lys-N, Lys-C және трипсиннің фосфопротеомның жаһандық талдауына үлес қосу қабілетіне қарай комплементарлылығын бағалаймыз.Төмен рН күшті катион алмасуының тазартылған нұсқасы N-терминалды ацетилденген, фосфорланған және модификацияланбаған пептидтерді тиімді бөлу үшін пайдаланылды.Барлығы 5036 артық емес фосфопептидтерді үш ферменттің комбинациясын пайдалана отырып, 1 мг ақуыздан <1% жалған ашу жылдамдығымен анықтауға болады.Біздің деректеріміз әртүрлі протеазалармен жасалған фосфопептидтер деректер жиынтығының арасындағы сәйкестіктің шекті екенін көрсетті, ал екі бірдей жасалған трипттік деректер жиынтығының арасындағы сәйкестік кем дегенде 4 есе жоғары екендігі анықталды.Осылайша, Lys-N және трипсинді қатар қолдану анықталған фосфопептидтер санының тек трипсинмен салыстырғанда 72%-ға артуына мүмкіндік берді, ал трипсинді қайталау тәжірибесі тек 25%-ға артты.Осылайша, тек трипсин мен Lys-N деректеріне назар аударған кезде біз 4671 артық емес фосфопептидтерді анықтадық.Анықталған учаскелерді одан әрі талдау Lys-N және трипсин деректер жинақтары айтарлықтай әр түрлі фосфорлану мотивтерімен байытылғанын көрсетті, бұл фосфопротеомды талдауда мультипротеаздық тәсілдердің өте құнды екенін одан әрі дәлелдеді.