Өнімдер

Колицин E1 арнасының доменінің мембраналық топологиясы флуоресценциялық резонансты энергияны тасымалдау (FRET) арқылы зерттелді.FRET донор ретінде генетикалық кодталған флуоресцентті амин қышқылын (кумарин) және FRET акцепторы ретінде DABMI (4-(диметиламино)фенилазофенил-4'-малеймид) байланған селективті таңбаланған цистеин қалдығын қамтыды.Флуоресцентті кумарин қалдығы протеинге ортогональды тРНҚ/аминоацил-тРНҚ синтетаза жұбы арқылы қосылды, бұл колицин арнасының доменіндегі кез келген учаскеге селективті қосылуға мүмкіндік берді.Әрбір нұсқа кумаринді біріктіру үшін тоқтату (TAG) мутациясын және DABMI тіркемесі үшін цистеин (TGT) мутациясын қамтыды.1-6 спиральдар ішіндегі алты спиральаралық қашықтық FRET талдауы арқылы еритін және мембранамен байланысқан күйлер үшін анықталды.FRET деректері мембраналық байланыс кезінде 3-6 спиральдар арасындағы спиральаралық қашықтықтардың үлкен өзгерістерін көрсетті, бұл арна доменінің мембранамен байланысқан құрылымы туралы жаңа түсінік береді.Жалпы алғанда, кумарин-DABMI FRET спиральаралық тиімділігі колицин арнасының қолшатыр моделіне негізделген мембранамен байланыстыру кезінде төмендеді.Ағымдағы және бұрын жарияланған FRET деректері негізінде арна доменінің жабық күйінің болжалды үлгісі әзірленді.Модель 1-7 спиральдардың жасушадан тыс жақтан сағат тілінің бағытымен айналмалы орналасуын және 8 және 9 спиральдардан құралған орталық трансмембраналық шаш қыстырғышының айналасында 1, 6, 7 және 10 спиральдардың мембрана аралық байланысын ұсынады.