Өнімдер

Ақуыздың фосфорлануы әртүрлі жасушалық функцияларды реттейді және өсімдіктердің ерте дамуында маңызды рөл атқарады.Арабидопсис өскіндеріндегі ақуыздың фосфорлануының алдыңғы зерттеулерін толықтыру және кеңейту үшін біз денатурацияланбайтын жағдайларда ақуызды экстракциялауды иммобилизацияланған металл иондарының ұқсастық хроматографиясымен (IMAC) біріктіретін балама әдісті қолдандық, ол Рубиско-тазаланған экстракттарда бұзылмаған фосфопротеиндерді байытумен (IMAC), содан кейін тістеумен байланысты. екі өлшемді гельдік электрофорез (2-DE) және сұйық хроматография-тандемдік масс-спектрометрия (LC-MS/MS) көмегімен.Гель ішіндегі трипсинді қорыту және таңдалған гель дақтарын талдау 144 фосфорланған пептидтер мен қалдықтарды анықтады, оның ішінде PhosPhAt 4.0 және P3DB Arabidopsis thaliana фосфорлану сайттарының дерекқорларында тек 18 фосфопептид пен 8 фосфозит табылды.Анықталған 82 фосфопротеиндердің жартысынан көбі көмірсулар алмасуына, фотосинтезге/тыныс алуға немесе тотығу стрессіне жауап беру механизміне қатысты.2-DE және LC-MS/MS алдында бұзылмаған фосфопротеиндерді байыту, пептидтік деңгейде байытуды пайдаланатын әдістермен салыстырғанда фосфорланған треонин мен тирозин қалдықтарын анықтауды күшейтеді, бұл екі тәсілдің фосфорлану аймағының қамтылуы тұрғысынан біршама толықтырылатынын көрсетеді.Жас өскіндер үшін алынған нәтижелерді бұрын жетілген арабидопсис жапырақтары үшін алынған нәтижелермен салыстыру осы тіндерде дифференциалды түрде фосфорланатын бес ақуызды анықтады, бұл әдіс өсімдіктің дамуы кезінде ақуыз фосфорлану динамикасын зерттеуге арналған әлеуетті көрсетеді.