Өнімдер

Антранил қышқылымен дериватизацияға және флуоресценцияны анықтауға негізделген гликозилтрансферазаларға арналған жаңа жоғары өнімді сұйық хроматографиялық талдау.

Талдаулар β1-4 галактозилтрансферазаның (GalT-1) және α2-6 сиалилтрансферазаның (ST-6) жоғары өнімді сұйықтықпен белсенділігін өлшеу үшін 2-аминобензой қышқылының (2AA; антранил қышқылы, АА) бірегей таңбалау химиясын қолданып әзірленді. Флуоресценцияны анықтаумен хроматография (HPLC) (Anumula KR. 2006. Гликопротеинді көмірсулардың жоғары өнімді сұйық хроматографиялық талдауы үшін флуоресцентті деривация әдістеріндегі жетістіктер. Anal Biochem. 350:1-23).N-ацетилглюкозамин (GlcNAc) және N-ацетиллактозамин акцепторлар ретінде және тиісінше GalT-1 және ST-6 үшін донорлар ретінде уридиндифосфат (UDP)-галактоза және цитидин монофосфат (CMP)-N-ацетилневрамин қышқылы (NANA) қолданылды.Ферменттік өнімдер in situ AA белгісімен таңбаланған және қалыпты фазалық жағдайларды пайдалана отырып, TSKgel Amide 80 бағанында субстраттардан бөлінген.Фермент бірліктері бір мезгілде алынған Gal-β1-4GlcNAc және NANA-α2-6 Gal-β1-4GlcNAc стандарттарымен салыстыру арқылы шыңдық аймақтардан анықталды.Талдаулар үшін сызықтық (уақыт және фермент концентрациясы), дәлдік (ішкі және аралық талдау) және қайталану мүмкіндігі белгіленді.Талдаулар оқшаулау және тазарту кезінде ферменттердің белсенділігін бақылауда пайдалы екені анықталды.Талдаулар өте сезімтал болды және радиоактивті қант негізіндегі дәстүрлі өлшеулерге тең немесе жақсырақ орындалды.Талдау пішімін басқа трансферазалардың белсенділігін өлшеу үшін де пайдалануға болады, егер көмірсулар қабылдағыштарында таңбалау үшін төмендететін ұшы бар болса.IgG көмегімен гликопротеинді акцепторларға талдау жасалды.IgG гликандарын (екілік G0, G1, G2, моно- және дисализирленген) бөлу үшін қысқа HPLC профилін жасау әдісі әзірленді, бұл GalT-1 және ST-6 белсенділіктерін жылдам анықтауға мүмкіндік берді.Сонымен қатар, бұл профильдеу әдісі клиникалық жағдайларда IgG гликандарындағы өзгерістерді бақылау үшін пайдалы болуы керек.