Өнімдер

5-фторурацилдің (5-ФУ) және екі эндогендік монофосфат нуклеотидтерінің бірнеше метаболиттерін нақты сандық түрде анықтау үшін біз сұйық хроматография-тандем масс-спектрометриясына (LC-MS/MS) негізделген түпнұсқа әдісті жасадық.Бұл талдау мыналарды анықтауға мүмкіндік берді: (i) 5-ФУ немесе 5-фтор-2′-дезоксиуридиннен (5-FdUrd) 5-фтор-2′-дезоксиуридин-5′-монофосфаттың (5-FdUMP) жасушаішілік өндірісін , (ii) 5-FdUMP концентрациясының жасушаішілік 2′-дезоксиуридин-5′-монофосфат (dUMP)/тимидин-5′-монофосфат (TMP) қатынасына әсері және (iii) 5-FdUMP және секреция дәрежесі ABC тасымалдаушылары арқылы адамның өсірілген жасушаларынан алынған 5-ФУ.Біздің эксперименттік шарттарымызда жасушалар 5-FU немесе 5-FUrd инкубацияланды.Содан кейін жасушалық ақуыздар метанолмен тұндырылды.Бұл процедура жоғары экстракцияны қалпына келтіруді қамтамасыз етті.Сонымен қатар, жасушалардан 5-FU және 5-FdUMP секрециясын өлшеу үшін біз қоректік ортада осы молекулалардың сандық мөлшерін анықтадық.Тасымалдаушы тікелей айдалды (5-FU) немесе Oasis Wax экстракциялық картриджін (5-FdUMP) пайдаланып қатты фазалық экстракциядан өтті.Талданатын заттарды бөлу жылжымалы фаза ретінде аммоний форматты буфер/метанол/су (5/5/90, к/т) пайдалана отырып, изократикалық режимі бар dC18 Atlantis 3,5 мкм, (100 мм × 2,1 мм id) бағанында орындалды.Жұмыс уақыты 6,2 минуттан аспады.Аналиттер теріс ион режимінде электроспрей интерфейсінде иондалды.Біз қосылыстарға сәйкес 2,5–150 нг мл -1 диапазонында әдісті растадық.Талдау ішіндегі және аралық өзгергіштік жеті күн ішінде 10%-дан төмен болды.Үлгілер -20 °C температурада кемінде екі апта сақталғанда және үш мұздату-еріту циклінен кейін барлық қосылыстар жасушаларда немесе қоректік ортада тұрақты болды.Екі ортада да матрицалық әсер байқалмады.