Өнімдер

ДНҚ негіздерінің тотығу зақымдануы әдетте тотыққан пуриндердің, атап айтқанда 7,8-дигидро-8-оксогуанин (8-оксоГ) және 7,8-дигидро-8-оксоаденин (8-оксоА) түзілуіне әкеледі, біріншісі жақсы белгілі мутагендік зақымдану.8-oxoG қалыпты негіздермен салыстырғанда әрі қарай тотығуға оңай ұшырайтындықтан, 8-oxoG тотыққан түріне қарама-қарсы ДНҚ синтезі кезінде негізді енгізу in vitro зерттелді.Жалғыз 8-oxoG зақымдануы бар синтетикалық шаблон алдымен әртүрлі бір электронды тотықтырғыштармен немесе синглет оттегі жағдайында өңделген, содан кейін Кленов фрагменті экзо- (Kf экзо-), бұзау тимус ДНҚ полимераза альфа (пол альфа) арқылы катализделген праймер ұзартылуына ұшыраған. ) немесе адам ДНҚ-полимераза бета (пол бета).Алдыңғы есептерге сәйкес dAMP және dCMP барлық үш ДНҚ полимеразалары бар 8-oxoG-ге қарсы таңдамалы түрде енгізіледі.Бір қызығы, 8-oxoG тотығуы өзгертілген негіз орнында пайда болатын праймер кеңеюінің уақытша тежелуімен Kf exo- арқылы зақымдануға қарсы dAMP және dGMP кірістіруін тудыратыны анықталды.Сонымен қатар, зақымдану полальфа және пол бета арқылы ДНҚ синтезі кезінде блокты құрайды.8-оксоА-модификацияланған үлгі олигонуклеотидпен жүргізілген тәжірибелер 8-оксоА да, 8-оксоА-ның тотыққан түрі де Kf экзо- арқылы dTMP тікелей кірістіретінін көрсетеді.Құрамында 8-оксоГ бар олигонуклеотидтердің IrCl62-мен тотығуға дейін және одан кейінгі масс-спектрометриялық талдауы негізінен 8-оксоГ учаскесінің тотығуына сәйкес келеді, нәтижесінде негізгі өнім ретінде гуанидиногидантоин бөлігі түзіледі.Абазиялық учаскелердің пайда болуы туралы дәлелдер алынған жоқ.Бұл нәтижелер 8-oxoG тотыққан түрі, мүмкін гуанидинохидантоин, ДНҚ синтезі кезінде dNTP-терді қате оқуға және қате енгізуге бағыттауы мүмкін екенін көрсетеді.Егер мұндай процесс in vivo орын алса, ол G-->T және G-->C трансверсияларына әкелетін нүктелік мутагендік зақымдануды білдіреді.Дегенмен, 8-оксоА-ның сәйкес тотыққан түрі, ең алдымен, Kf экзо-мен ДНҚ синтезі кезінде Т-ның дұрыс енгізілуін көрсетеді.