Өнімдер

Бір мезгілдегі мутациялардың әсерлерінің ферментативті белсенділікті өзгерту үшін біріктіру тәсілін болжау оңай емес, өйткені бұл әсерлер әрқашан сызықтық түрде аддитивті бола бермейді.Демек, субстратты байланыстыратын аминқышқылдары қалдықтарының бір мезгілдегі мутацияларының әсерін сипаттау ферменттердің субстрат ерекшелігін түсінуге айтарлықтай үлес қоса алады.Spodoptera frugiperda (Sfbetagly) бета-гликозидазасында Q39 және E451 қалдықтарының екеуі де субстратпен әрекеттеседі және бұл субстраттың ерекшелігін анықтау үшін өте маңызды.Сфбетаглидің қос мутанттары (A451E39, S451E39 және S451N39) сайтқа бағытталған мутагенез арқылы дайындалды, бактерияларда экспрессияланды және ұқсастық хроматографиясы арқылы тазартылды.Бұл ферменттер субстраттар ретінде p-нитрофенил бета-галактозид пен p-нитрофенил бета-фукозидті қолдану арқылы сипатталды.Q39 және E451 позицияларындағы учаскеге бағытталған мутациялары бар Sfbetagly бір және қос мутанттары үшін k cat/Km қатынасы қос мутациялардың (Gdouble) ESdouble қанжарының (фермент-өтпелі күй кешені) бос энергиясына әсерін көрсету үшін пайдаланылды. daggerxy) жалғыз мутация нәтижесінде пайда болатын әсерлердің қосындысы емес (Gdouble daggerx және Gdouble daggery).Gdouble қанжарындағы бұл айырмашылық жалғыз мутациялардың әсерлерінің ішінара қабаттасатынын көрсетеді.Демек, бұл жалпы әсер Gdouble Daggerxy-де тек бір рет есептеледі.Бета-гликозидазалар туралы кристаллографиялық деректер Q39 және E451 қалдықтары және субстраттың бірдей гидроксил тобы қатысатын бидент сутегі байланысының болуын көрсетеді.Сондықтан термодинамикалық және кристаллографиялық деректер Q39 және E451 қалдықтарының субстратпен сәйкес әрекеттесуіне өзара әсер ететінін көрсетеді.